期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2005年第02期

蚊抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定

顾燕;公茂庆;胡小邦;孙艳;马磊;李秀兰;朱昌亮

关键词:糜蛋白酶基因, 昆虫细胞表达载体, 抗药性, 基因转染, C6/36细胞
摘要:目的建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系. 方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区;经T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到真核表达载体pIE1-3,构建重组昆虫细胞表达载体pIE1-3/chy,经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1-neo质粒共转染蚊细胞C6/36,通过G418选择培养,建立转染细胞系;用RT-PCR、Western blotting鉴定糜蛋白酶基因的转录表达. 结果成功构建了真核表达载体pIE1-3/chy,证明糜蛋白酶基因已转入C6/36细胞,建立了稳定转染细胞系,表达产物分子质量单位约30 ku,与理论值相符. 结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究糜蛋白酶基因与抗药性的关系奠定了基础.