期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2007年第06期

金葡菌野生株SEB基因的亚克隆及其原核表达

高世同;张仁利;刘会娟;秦莉;耿艺介;黄达娜;吴少庭

关键词:金黄色葡萄球菌, 肠毒素B, 克隆和表达
摘要:目的 亚克隆金葡菌野生株S407030肠毒素B(SEB)基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中表达,以获得重组SEB(Rseb)蛋白.方法 将含有SEB基因的质粒Pmd-18T/SEB双酶切获得目的片段,插入表达载体Pgex-4T-2中构建重组子Pgex-4T-2/SEB,并转化E.coli JM109感受态菌,阳性克隆以双酶切和PCR法鉴定;含重组质粒的工程菌以IPTG诱导表达Rseb蛋白;表达产物进行SDS-PAGE分析,并采用B-PER GST融合蛋白试剂盒纯化重组Rseb,Western blot鉴定其免疫反应性.结果 重组质粒经双酶切和PCR扩增鉴定均获得约705 bp的基因片段,与预期结果相一致;诱导表达的含GST的融合重组Rseb蛋白分子质量单位约为53 ku,纯化后作SDS-PAGE电泳显示一条蛋白带,Western blot显示Rseb能够被兔抗SEB抗体识别.结论 金葡菌野生株SEB在大肠埃希氏菌中得到有效表达,并获得电泳级纯度的重组Rseb,重组蛋白具有一定的免疫活性,为进一步研究其生物毒性与开发诊断试剂提供了生物材料.