期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2009年第05期

华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子的分子生物学及免疫学定位研究

张咏莉;吴德;詹苗;胡旭初;徐劲;吴忠道;余新炳

关键词:华支睾吸虫, RNA聚合酶Ⅱ延长因子, 免疫识别, 免疫定位
摘要:目的 由华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选重要新基因并进行功能基因研究.方法 生物信息学、基因克隆表达技术、免疫识别、S-P免疫组化等方法.结果 由华支睾吸虫成虫cDNA文库成功分离到了CsRPEF(RNA聚合酶Ⅱ延长因子)基因.通过BLASTX程序同源性比对,显示CsRPEF基因与小鼠和人类的RPEF基因同源性为82%.成功构建了CsRPEF原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行了大规模诱导表达,所表达的GST融合蛋白经蛋白酶原切割后获得CsRPEF重组蛋白.凝胶扫描分析和Bradford法显示,CsRPEF重组蛋白的纯度和浓度分别为85%和(0.73±0.02) mg/ml.将CsRPEF重组蛋白接种至BALB/c小鼠进行免疫实验.间接ELISA法显示免疫小鼠抗体滴度达1∶150.免疫识别结果显示此抗体可识别20 ku CsRPEF重组蛋白和华支睾吸虫20 ku虫源性蛋白.S-P免疫组化方法显示CsRPEF主要定位于华支睾吸虫成虫的表皮、皮下组织和虫卵三部位.CsRPEF新基因序列GenBank的登录号为EU232119.结论 CsRPEF基因是防治华支睾吸虫病生物药物研发的重要靶点.