期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2009年第02期

结核分枝杆菌Ag85B的基因克隆及表达

李晓恒;吴少庭;付小强;甘燕;王芳;雷蕾

关键词:结核分枝杆菌, Ag85B, 基因克隆, 蛋白表达
摘要:目的 克隆结核分枝杆菌Ag85B基因,在大肠埃希菌中进行表达,获得纯化的重组Ag85B蛋白. 方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增Ag85B基因,以质粒PET23a(+)为表达载体构建Ag85B重组质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE电泳和Western blot技术分析鉴定Ag85B蛋白表达,采用Novagen公司生产的His Bind蛋白纯化试剂盒纯化Ag85B蛋白. 结果 构建了具有正确基因序列的Ag85B重组表达质粒,经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白分子质量单位约为33 ku,Western blot鉴定能被抗His单抗识别,该重组Ag85B蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)中以包涵体形式存在. 结论 目的 基因克隆入宿主菌中并表达成功,纯化的重组Ag85B蛋白为进一步的研究与应用奠定了基础.