期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2012年第07期

粉尘螨变应原第16组分基因克隆及表达

周鹰;孙金霞;王运刚;杨李;马桂芳;崔玉宝;季晓晖

关键词:粉尘螨, 变应原, 原核表达, 生物信息学
摘要:目的 获得粉尘螨变应原第16组分(Der f 16)编码基因并构建其原核表达体系.方法 提取粉尘螨总RNA,根据GenBank (AF465625)设计并合成引物,经RT-PCR合成Der f 16全长基因,克隆至pCold TF DNA载体,热转化至E.coli JM109;将测序正确的pCold TF- Der f 16质粒转化BL21 (DE3),IPTG诱导表达,并用SDS PAGE验证产物.结果 RT PCR扩增获得目的基因Der f 16,全长1 443 bp,与参考序列同源性99.72%.将构建的pCold TF-Der f16质粒转化宿主菌E.coli BL21后进行诱导,SDS-PAGE电泳显示其全细胞、上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物.生物信息学分析显示该重组蛋白由480个氨基酸组成,分子质量单位为55.1315 ku,二级结构由(-螺旋(35.21%)、延伸主链(20.83%)和无规卷曲(43.96%)组成.该变应原含有4个凝溶胶蛋白位点.结论 粉尘螨变应原第16组分原核表达获得成功,为进一步规模生产该变应原并应用于临床诊治奠定了基础.