期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2013年第11期

刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建

张晓磊;张进顺;朱晓波;王春苗;贾晓晖;贾天军;徐云鹏;高雪

关键词:刚地弓形虫, ROP11, 真核表达质粒
摘要:目的 构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白11(ROP11)的真核表达重组质粒并在真核细胞中表达目的蛋白. 方法 设计合成弓形虫ROP11基因引物,运用RT-PCR方法扩增ROP11基因并克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1 ROP11.将重组质粒转染HeLa细胞,采用间接免疫荧光法检测目的蛋白表达. 结果 RT-PCR扩增弓形虫ROP11基因片段为1 548 bp,与预期大小相符.构建的重组质粒pcDNA3.1-ROP11经PCR及EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切鉴定正确.重组质粒测序后与GenBank报道的ROP11基因比对,核苷酸序列同源性和推导氨基酸序列同源性均为99%.免疫荧光检测显示,在重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光,对照组无荧光. 结论 成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-ROP11,该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础.