期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2013年第10期

弓形虫Rhomboid-1蛋白基因的克隆及原核表达

杨拓;宫鹏涛;杨举;张国才;李赫;张西臣;李建华

关键词:弓形虫, Rhomboid蛋白, 克隆, 原核表达
摘要:目的 克隆并原核表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Rhomboid-1 (TgROM1)蛋白. 方法 收集、纯化弓形虫速殖子,用Trizol法提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增TgROM1基因,回收的PCR产物与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-TgROM1.将重组克隆质粒亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-TgROM1并转化至Rosetta感受态,用IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 成功克隆了643 bp的TgROM1基因,双酶切鉴定重组表达质粒pGEX-4T-1-TgROM1构建正确.SDS-PAGE检测重组表达质粒表达的TgROM1蛋白分子质量约为48 ku,Western blot检测表明该蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别.结论 成功克隆了弓形虫ROM1基因并原核表达了具有反应原性的重组TgROM1蛋白,为该蛋白的功能研究奠定了基础.