期刊简介
本刊坚持以马克思主义、毛泽东思想为指导，遵循党的基本路线，贯彻理论与实践相结合，普及与提高相结合，“百花齐放，百家争鸣”的方针，坚持面向科研、教学、临床和防治，充分反映我国病原生物学的研究水平，促进我国病原生物学事业的发展。
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首页>中国病原生物学杂志
- 杂志名称：中国病原生物学杂志
- 主管单位：中国寄生虫病防治杂志
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：11-5457/R
- 国内刊号：11-5457/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录：上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
成岩；白靓；董丽刚；韩梅；王敏；张冬丽；霍万学
关键词：布鲁氏菌, L7/L12, 基因克隆, 多克隆抗体
摘要：目的 用大肠埃希菌表达布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白,制备其多克隆抗体.方法 设计引物,以S2弱毒株DNA基因组为模板扩增目的基因片段L7/L12,构建pET28a-L7/L12质粒并转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE检测表达蛋白的可溶性及其分子质量;金属亲和层析法纯化目的蛋白,BCA法对纯化蛋白定量.将rL7/L12蛋白与弗氏完全佐剂混合(终浓度为0.5 mg/ml),每次1 ml分两次间隔21d免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.免疫结束后12d,颈静脉采血,分离血清,采用间接ELISA法检测血L清抗体效价.以免疫血清1∶200倍稀释作为一抗,采用Western blot分析其与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白及大肠埃希菌DH5α全菌体蛋白结合的特异性.结果 经测序与酶切鉴定,成功构建表达载体pET28a-L7/L12,SDS-PAGA分析表达产物部分为可溶性,分子质量单位约为14 ku;SDS-PAGE分析亲和纯化蛋白为单一条带,蛋白质含量为0.8 mg/ml.间接ELISA检测免疫血清抗体效价为1∶12 800,该抗体能够与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白结合,而不与大肠埃希菌DH5α菌体蛋白结合.结论 成功克隆L7/L12基因并表达出目的蛋白,制备的抗布鲁氏菌S2株r-L7/L12多克隆抗体能特异识别该表达蛋白.
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