期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2014年第02期

旋毛虫亲肌肉抗原的基因克隆和序列分析

赵香菊;王丽娜;王晶;刘芳馨;陈晓宁

关键词:旋毛虫, 亲肌肉抗原, 基因克隆
摘要:目的 克隆一个新的旋毛虫基因即亲肌肉抗原(myophilin)并分析其序列同源性,为旋毛虫病疫苗的研制奠定基础. 方法 检索GenBank旋毛虫基因组数据库,获得旋毛虫亲肌肉抗原的cDNA序列,利用Primer5.0软件设计引物(上、下游引物分别含NdeⅠ和Xho Ⅰ酶切位点).收集云南株旋毛虫肌幼虫,提取总RNA,并以此为模板进行RT-PCR.将PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳,目的基因切胶回收后与克隆载体pMD-19T分别用Nde Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切,酶切产物以3∶1的比例与pMD-19T连接,然后转化到DH5a大肠埃希菌感受态细胞中,用Amp抗性培养基培养,阳性克隆提质粒后做PCR及双酶切鉴定,阳性菌液进行测序,测序结果与检索基因核苷酸序列通过DNAMAN软件比较,分析其同源性. 结果 RT-PCR扩增出旋毛虫亲肌肉抗原全长基因序列,大小为579 bp;亲肌肉抗原基因重组质粒经双酶切得到的片段大小分别为579、2 300和300 bp,与预期值相符;该基因序列与检索基因核苷酸序列相比,同源性为100%. 结论 成功克隆出旋毛虫亲肌肉抗原基因,为旋毛虫病疫苗的研制奠定了基础.