期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2014年第01期

柔嫩艾美尔球虫EGF-like结构域基因的克隆及原核表达

杨拓;李新;宫鹏涛;张西臣;李建华

关键词:柔嫩艾美尔球虫, EGF-like, 原核表达
摘要:目的 克隆并原核表达柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)微线蛋白4(EtMIC4)的EGF-like结构域.方法 收集并纯化柔嫩艾美尔球虫子孢子,用 Trizol法提取总RNA,并反转录成cDNA,利用RT-PCR技术扩增EtMIC4EGF-like基因;回收PCR产物,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-EGF-like.然后亚克隆至原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET 30a-EGF-like并转化至Transetta感受态,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 成功克隆了 EtMIC4 EGFdike(390 bp)基因,双酶切鉴定重组表达质粒pET-30a-EGF-like构建正确.SDS-PAGE分析重组EGF-like蛋白的分子质量单位约为30 ku,Western blot显示该蛋白能被鸡抗柔嫩艾美尔球虫血清识别.结论 成功构建了pET-30a EGF-like原核表达质粒,并证明其原核表达产物EGF-like蛋白具有反应原性,为该蛋白的功能研究奠定了基础.