期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2015年第08期

结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶的表达和纯化以及小鼠多抗血清的制备

曹田宇;吉思雨;褚阳光;王丽梅;康健;王立飞;徐志凯;柏银兰

关键词:结核病, 结核分枝杆菌, c-di-AMP, 原核表达, 抗体
摘要:目的 表达和纯化结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶,并制备多克隆抗体,为研究c-di-AMP在MTB生理过程中的作用奠定基础. 方法 从MTB基因组中PCR扩增c-di-AMP合成酶Rv3586基因,构建原核表达载体,序列鉴定后,IPTG诱导目的基因表达,采用Western-blot鉴定目的蛋白,并用离子亲和层析法纯化重组蛋白;用纯化蛋白经背部皮下免疫小鼠,收集小鼠血清,用免疫学方法测定抗体滴度及其特异性. 结果 PCR成功扩增Rv3586基因,限制性酶切分析和序列测定结果表明成功构建原核表达载体;表达的重组c-di-AMP合成酶蛋白分子质量大小约43 ku,该蛋白可被抗His标签抗体和感染小鼠血清识别.用纯化蛋白免疫小鼠,初次免疫后抗体滴度可达1∶12 800,且该多克隆抗体可识别结核分枝杆菌和卡介苗c-di-AMP合成酶. 结论 在E.coli中成功表达c-di-AMP合成酶,并制备了多克隆抗体,可用于结核分枝杆菌c-di-AMP生物学功能的进一步研究.