期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2015年第07期

沙门氏菌LAMP检测方法的建立

吴家林;沙丹;马广源;孙燕萍

关键词:环介导等温扩增, 沙门氏菌, invA基因
摘要:目的 建立检测沙门氏菌的环介导等温扩增技术. 方法 针对沙门氏菌侵袭蛋白基因(invA),用LAMP引物在线设计软件设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立了快速检测食品中沙门氏菌的环介导等温扩增方法.对dNTP浓度、Mg2+浓度、内引物浓度和外引物浓度等反应条件进行优化,并测定方法的特异性和灵敏度,然后用该方法对猪肉模拟样品和猪肉实物样品进行检测. 结果 优化的LAMP反应体系为:0.8 mmol/L dNTP,6.0 mmol/LMgCl2,0.2μmol/L外引物F3和B3,1.6 μmol/L内引物FIP和BIP.对6种相关肠道细菌进行LAMP扩增,仅含invA基因的沙门氏菌扩增阳性.对细菌纯培养物检测的灵敏度为101 cfu/ml,对猪肉模拟样品检测的灵敏度为102 cfu/g.采用环介导等温扩增方法检测57份猪肉实物样品,invA基因阳性5份.LAMP方法检测(包括DNA提取、LAMP反应和电泳分析)可在2h内完成. 结论 检测沙门氏菌的环介导等温扩增方法快速、灵敏、特异,适合在基层食源性疾病监测和应急检测中应用.