期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2015年第05期

结核分枝杆菌早期分泌靶抗原和抗原85B融合蛋白的原核表达及其在血清学检测中的初步应用

石洁;朱岩昆;马晓光;王少华;李辉;邢进;闫国蕊

关键词:结核分枝杆菌, 早期分泌抗原靶6 ku蛋白, 抗原85, 原核表达
摘要:目的 原核表达结核分枝杆菌抗原早期分泌抗原靶6 ku蛋白和抗原85B融合蛋白,建立融合抗原对结核病人快速诊断方法. 方法 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中PCR扩增ag85B和Rv3875基因并构建表达载体pGEX4T-1上,转化BL21经IPTG诱导表达GST-85B-ESTA-6融合蛋白,对包涵体进行变性和透析复性后进行GST亲和层析纯化,纯化的可溶性目的蛋白用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行鉴定;以融合蛋白为抗原,采用ELISA检测结核病人血清抗体. 结果 成功构建了结核分枝杆菌ag85B和Rv3875融合基因原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21后经诱导产生了高水平的GST-85B-ESTA-6,该蛋白存在于菌体沉淀中,以包涵体形式居多.包涵体经变性、复性后用GST亲和层析纯化,纯化蛋白仍能与结核病患者血清反应,即可用于病人血清抗体检测. 结论 成功构建了pGEX4T-1-ag85B-Rv3875重组质粒,并诱导表达了含有GST-标签的ESAT-6-85B融合蛋白,为进一步研究结核菌的免疫机制奠定了基础.