期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2015年第01期

中东呼吸综合征冠状病毒半巢式PCR检测方法的建立

迟航;郑学星;盖微微;王翀;张渭蛟;王化磊;冯娜;王铁成;赵永坤

关键词:中东呼吸综合征冠状病毒, 半巢式PCR, 检测方法, 敏感, 特异
摘要:目的 建立特异、灵敏的半巢式PCR方法以期用于检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV). 方法 根据MERS-CoV N蛋白基因设计并合成特异性内侧、外侧引物.通过条件优化,建立MERS-CoV半巢式PCR检测体系,扩增产物测序后与目的序列进行同源比对.以10倍系列稀释重组质粒为标准品,与普通PCR反应进行比较,检测半巢式PCR方法的灵敏度.以其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因为对照,检测半巢式PCR方法的特异性. 结果 使用建立的半巢式PCR方法扩增的特异片段与GenBank中发表的MERS-CoV基因序列同源性为100%;半巢式PCR检测方法的灵敏度为1.17×101拷贝,比普通一轮PCR扩增的灵敏度(1.17×10 5拷贝)提高了104倍;用该方法检测MERS-CoV基因为阳性,其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因检测均呈阴性. 结论 建立的MERS-CoV半巢式PCR方法具有良好的准确性、灵敏性和特异性,为MERS-CoV感染的诊断提供了一种新的、可靠的检测手段.