期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2016年第11期

阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克隆、表达及鉴定

王文柯;贾鑫;曹磊;王黎;薛长贵

关键词:阴道毛滴虫, RRas基因, 一步克隆, 原核表达, Western blot
摘要:目的 一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能. 方法 用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠埃希菌(E.coli) BL21,经异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导.表达产物用Ni-Agarose His纯化试剂盒纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定和Western blot分析. 结果 从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的RRas基因片段长617 bp,酶切及DNA测序证实RRas-PQE-80L重组质粒构建正确.表达的融合蛋白分子质量单位约为23.6 ku,该蛋白能被抗His标签抗体识别. 结论 成功构建重组原核表达质粒RRas-PQE-80L载体,并能在E.coli BL21中表达,表达蛋白具有反应原性.