期刊简介
本刊坚持以马克思主义、毛泽东思想为指导，遵循党的基本路线，贯彻理论与实践相结合，普及与提高相结合，“百花齐放，百家争鸣”的方针，坚持面向科研、教学、临床和防治，充分反映我国病原生物学的研究水平，促进我国病原生物学事业的发展。
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首页>中国病原生物学杂志
- 杂志名称：中国病原生物学杂志
- 主管单位：中国寄生虫病防治杂志
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：11-5457/R
- 国内刊号：11-5457/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录：上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
霍乱弧菌转录调控因子AphB C端结构域的原核表达与纯化结晶
苏萌；王卉；钟增涛；杜娈英；高妍夏
关键词：AphB, 表达, 纯化, 结晶
摘要：目的 AphB是霍乱弧菌毒力基因表达调控网络中重要的转录调控因子,可激活毒力基因表达,本实验目的在于得到AphB蛋白C端结构域的晶体结构,为研究其与辅助诱导物结合之后的构象改变对于毒力调控网络的影响奠定基础. 方法 以霍乱弧菌的AphB蛋白C端结构域为对象,将目的基因克隆到表达载体pET-32a(+)上,使重组质粒在大肠埃希菌中高效表达目的蛋白,然后利用镍离子亲和层析、MonoQ离子交换层析和GF75凝胶过滤层析法进行纯化.分别选取5、10、20和30 mg/ml的目的蛋白,采用悬滴气相扩散法进行蛋白结晶,筛选结晶试剂盒条件,在得到初晶的结晶条件基础上通过改变蛋白与池液混合比例、结晶池液成分、环境温度等进行结晶条件的优化. 结果 含有目的基因的重组质粒在大肠埃希菌中高效表达可溶性目的蛋白.利用3种蛋白纯化方法依次进行纯化,得到较高纯度的目的蛋白.对蛋白结晶试剂盒结晶条件进行优化,得到的优结晶条件为:蛋白浓度为30 mg/ml;池液成分为0.1 mol/LBIS-TRIS,2.0 mol/L Ammonium sulfate,pH5.0,18℃环境孵育24 h.用优化的结晶条件进行结晶处理,得到分辨率为2.1A的蛋白晶体. 结论 通过原核表达和用优化的结晶条件得到了霍乱弧菌AphB蛋白C端结构域的蛋白晶体,所得数据为蛋白的空间结构解析提供了重要依据,对蛋白C端结构域与辅助诱导物结合的功能研究奠定了基础.
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