期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2017年第07期

蜡样芽孢杆菌非溶血性肠毒素基因的原核表达及多克隆抗体制备

鲁爽;聂志超;董歆;孟旭;陈克平

关键词:蜡样芽孢杆菌, 非溶血型肠毒素, 原核表达, 多克隆抗体
摘要:目的 分别对非溶血性肠毒素基因(Nhe)的3个亚基进行原核表达,并对蜡样芽孢杆菌分泌的非溶血性肠毒素蛋白进行免疫学鉴定. 方法 根据NCBI数据库非溶血性肠毒素NheA、NheB、NheC基因序列设计引物,以蜡样芽孢杆菌的基因组为模板,PCR扩增NheA、NheB、NheC基因.分别将3个基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)后转化到大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,进行SDS-PAGE分析以及Western blot分析,并免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体. 结果 经PCR和酶切鉴定,成功构建重组表达载体.重组表达载体分别转化至BL21 (DE3),经IPTG诱导表达相应的目的蛋白,分子质量单位分别为NheA 40 ku,NheB 44 ku,NheC 40 ku.经电离飞行时间质谱鉴定,重组蛋白NheA、NheB和NheC表达正确.3种目的蛋白经SDS-PAGE电泳后分别割胶回收,免疫新西兰大白兔,获得重组多克隆抗体. 结论 成功构建了NheA、NheB、NheC基因重组表达载体,表达的重组蛋白免疫新西兰兔获得相应的克隆抗体,为进一步研究非溶血型肠毒素的结构和功能奠定了基础.