期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2017年第06期

粉尘螨变应原Der f 2在毕氏酵母中表达及圆二色谱分析

王楠;俞黎黎;崔玉宝

关键词:粉尘螨, 变应原, 基因克隆, 基因表达, 圆二色谱分析
摘要:目的 克隆粉尘螨变应原Der f 2编码基因,并构建毕氏酵母表达体系,对表达产物进行圆二色分析. 方法 提取粉尘螨总RNA,根据GenBank中的序列设计并合成简并引物,PT PCR扩增Der f 2全长基因,与pGAPZα-A载体连接后转化至E.coli Top10F,取阳性克隆并测序;将pGAPZα-A-Der f 2用Bln Ⅰ进行线性化,电转化至GS115感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,采用SDS-PAGE验证表达产物,用His Trap HP亲和柱纯化重组蛋白Der f2,进行圆二色谱扫描分析. 结果 PCR扩增获得Der f 2编码基因,成功构建表达质粒pGAPZα-A-Der f 2,SDS-PAGE验证表明该质粒在GS115感受态细胞中正常表达,表达产物分子质量单位为14.9 ku,重组蛋白Der f 2纯化后进行圆二色谱数据分析,其二级结构α-螺旋占41.2%,转角占10.3%,β-折叠占26.8%,不规则卷曲占21.7%. 结论 尘螨变应原Der f2在毕氏酵母中成功表达,为该变应原的进一步研究及规模生产和应用奠定了基础.