期刊简介
本刊坚持以马克思主义、毛泽东思想为指导，遵循党的基本路线，贯彻理论与实践相结合，普及与提高相结合，“百花齐放，百家争鸣”的方针，坚持面向科研、教学、临床和防治，充分反映我国病原生物学的研究水平，促进我国病原生物学事业的发展。
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首页>中国病原生物学杂志
- 杂志名称：中国病原生物学杂志
- 主管单位：中国寄生虫病防治杂志
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：11-5457/R
- 国内刊号：11-5457/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录：上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
小鼠SOCS1基因沉默重组慢病毒载体的构建及其在DC2.4细胞中的表达
王琼；刘维达；史冬梅
关键词：慢病毒载体, 细胞因子信号传导抑制因子1, 树突状细胞
摘要：目的 构建携带小鼠SOCS1基因沉默重组慢病毒载体,鉴定其在小鼠树突状细胞系(DC2.4)中SOCS1基因的表达并筛选稳定沉默表达SOCS1基因的小鼠树突状细胞系. 方法 根据小鼠SOCS1基因筛选相应靶序列,与表达载体pYr-Lvsh连接后转化感受态DH5α细胞,挑取细胞克隆进行酶切及测序鉴定,鉴定正确的载体转染293FT细胞,进行慢病毒包装及滴度测定.将包装的慢病毒PLV-musSOCS1-shRNA转染DC2.4细胞系,通过荧光显微镜、流式细胞仪及real-time PCR检测DC2.4细胞中SOCS1基因的表达,通过台盼蓝染色检测转染后细胞活性. 结果 表达载体pYr-Lvsh测序显示引物完全连接到载体上.将测序所得序列与引物比对,PLV-musSOCS1-sh构建成功.扩增后检测慢病毒滴度约为4×109 TU/ml.慢病毒转染24 h后荧光显微镜下可见少量表达绿色荧光的DC2.4细胞,且随着时间的延长,转染成功的细胞逐渐增多,细胞内荧光强度渐次增强,48 h后表达量明显增多,72 h后更加明显.经流式细胞仪检测,转染48 h及72 h细胞绿色荧光表达率均达100％.对照组的细胞活性为(92.27±0.80)％,转染组转染后48h的细胞活性为(88.40±0.92)％,差异有统计学意义(t=5.499,P＜0.01);转染组转染后72 h的细胞活性为(44.97±3.70)％,与对照组及48 h转染组比较差异有统计学意义(t值分别为21.637和19.733,P＜0.01).real-time PCR检测,转染组SOCS1基因相对表达量较空病毒载体对照组下调约75.3％(t=-10.179,P＜0.01). 结论 构建的慢病毒PLV-musSOCS1-shRNA在DC2.4细胞中成功沉默SOCS1基因并稳定表达,成功筛选出低表达SOCS1基因的小鼠树突状细胞系,为通过SOCS1基因沉默调控DC免疫状态抗真菌感染免疫等相关研究奠定了基础.
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