期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2018年第07期

幽门螺杆菌胶原蛋白酶HpPrtC的表达、纯化及结晶尝试

田新利;刘东;郭玲;崔丽伟;刘威

关键词:幽门螺杆菌, HpPrtC, hp0169, 胶原蛋白酶, 结晶
摘要:目的 原核表达、纯化并筛选幽门螺旋菌胶原蛋白酶的结晶条件.方法通过基因重组构建幽门螺杆菌hp0169基因重组表达质粒, 在大肠埃希菌进行重组蛋白的原核表达;经Ni 2+亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白;通过Hampton Research结晶试剂盒筛选蛋白结晶条件.结果 扩增的幽门螺杆菌hp0169基因片段略大于1 000bp, 构建重组质粒pET-28a-hp0169, 转化至大肠埃希菌BL21 (DE3) 菌株后以IPTG诱导表达该U32家族蛋白酶HpPrtC;亲和层析, 离子交换及凝胶过滤层析纯化的目标蛋白经SDS-PAGE鉴定为HpPrtC蛋白单体和二体, 分子质量单位 (Mr) 为50×103和100×103, 但以单体形式为主.使用结晶机器人筛选HpPrtC蛋白的初始结晶条件为0.2mol/L MgCl2, 0.1mol/L Tris, pH 8.5, 3.4mol/L己二醇.结论 HpPrtC可在大肠埃希菌中可溶性表达, 并具有较好的可结晶性, 为其结构与功能研究奠定了基础.