期刊简介
本刊坚持以马克思主义、毛泽东思想为指导，遵循党的基本路线，贯彻理论与实践相结合，普及与提高相结合，“百花齐放，百家争鸣”的方针，坚持面向科研、教学、临床和防治，充分反映我国病原生物学的研究水平，促进我国病原生物学事业的发展。
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首页>中国病原生物学杂志
- 杂志名称：中国病原生物学杂志
- 主管单位：中国寄生虫病防治杂志
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：11-5457/R
- 国内刊号：11-5457/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录：上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
刚地弓形虫ROP10-ROP18真核表达载体的构建与鉴定
刘荣荣；张晓磊；张进顺；贾晓晖；刘楠
关键词：刚地弓形虫, 棒状体蛋白10, 棒状体蛋白18, 重组质粒, 真核表达载体
摘要：目的 构建刚地弓形虫棒状体蛋白10 (ROP10)、棒状体蛋白18(ROP18)复合基因真核表达载体pVAXD-ROP10-ROP18,并在HeLa细胞内表达目的蛋白. 方法 设计ROP10、ROP18基因特异引物,采用RT-PCR扩增ROP10、ROP18基因并测序,将ROP10和ROP18基因分别定向插入双启动子真核表达载体pVAXD的多克隆位点中,构建单价质粒pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18,然后将ROP18基因插入pVAXD-ROP10中构建双启动子真核表达载体pVAXD-ROP10-ROP18.经PCR和双酶切验证后将pVAXD-ROP10-ROP18转染至HeLa细胞内,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板分别进行ROP10基因和ROP 18基因的RT-PCR鉴定;采用间接免疫荧光试验(IFA)检验ROP10和ROP18蛋白表达情况. 结果 成功克隆ROP10、ROP18基因片段并构建了重组质粒pVAXD-ROP10-ROP18,测序、双酶切和PCR验证重组质粒构建正确.分别将3种重组质粒转染至HeLa细胞后经RT-PCR鉴定,pVAXD-ROP10-R()P18组可同时扩增出1 761 bp(ROP10基因)和1 665 bp(ROP18基因)2个片段,而pVAXD-ROP10组和pVAXD-ROP18组分别扩增出1 761 bp和1 665 bp的目的片段;IFA显示pVAXD-ROP10组和pVAXD-ROP18组均有绿色荧光,即分别表达ROP10和ROP18蛋白. 结论 成功构建重组质粒pVAXD-ROP10-ROP18、pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18质粒可在真核细胞中分别表达ROP10和ROP18两种蛋白.
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