期刊简介

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  • 杂志名称:中国病原生物学杂志
  • 主管单位:中国寄生虫病防治杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-5457/R
  • 国内刊号:11-5457/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中华预防医学会、系列杂志优秀期刊期刊收录:上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中国病原生物学杂志2018年第02期

犬圆环病毒ORF3基因的克隆及表达载体的构建

孙文超;汪伟;曹亮;赵翠青;赵海洋;刘立明;孟娟;韩继成;许汪;王茂鹏;陈征;张涵;郭丹丹;陆祎婷;夏秀秀;郑敏;鲁会军;金宁一

关键词:犬圆环病毒, ORF3, 原核表达
摘要:目的 克隆犬圆环病毒(Canine circovirus,CanineCV) ORF3基因,制备ORF3的抗体,为研究ORF3的功能奠定基础. 方法 以CanineCV基因组为模板,PCR扩增编码框ORF3全长序列.将ORF3基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET(28a)-ORF3.重组质粒转化入感受态细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白ORF3,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定. 结果 PCR扩增出CanineCV编码框ORF3片段长度为318 bp.构建的重组质粒pET(28a)-ORF3转化DE3后经IPTG诱导5h,表达分子质量单位(Mr)约为15×103蛋白,与预期相符.Western blot显示重组蛋白能被Anti-His标签抗体识别. 结论 成功构建了pET(28a)-ORF3重组原核表达质粒,并能在大肠杆菌中表达具有免疫反应性的ORF3,为抗ORF3抗体的制备奠定了基础.